分子模拟对接和定点突变提高10β–去乙酰巴卡亭-华南农业大学学报

华南农业大学学报 2018, 39(5): 87-92

Journal of South China Agricultural University doi: 10.7671/j.issn.1001-411X.2018.05.013

欧阳萍兰, 黄佳俊, 林淑玲, 等. 分子模拟对接和定点突变提高10β–去乙酰巴卡亭Ⅲ乙酰氧基转移酶的活力[J]. 华南农业大学学报, 2018, 39(5): 87-92.

分子模拟对接和定点突变提高10β–去乙酰巴卡亭Ⅲ

乙酰氧基转移酶的活力

1,2 1,2 1,2 1,2 1,2 1,2 1 1

欧阳萍兰 ，黄佳俊 ，林淑玲 ，魏　韬 ，林俊芳 ，郭丽琼 ，刘俊峰，刘绮倩

(1 华南农业大学 食品学院，广东 广州 510642；  2 广东省微生态制剂工程技术研究中心，广东 广州 510640)

摘要: 【目的】提高 10β –去乙酰巴卡亭Ⅲ乙酰氧基转移酶(DBAT)活力，从而更高效地体外酶促合成巴卡亭Ⅲ。

【方法】通过DBAT与其天然底物乙酰CoA 的计算机分子模拟对接，选定C165W、N300I、F160C 3个氨基酸残基进

行单点定点突变。突变基因经大肠埃希菌重组表达，突变重组酶特性经体外酶促反应测定。【结果】3种突变重组酶

的相对分子质量为67 000；最适反应温度均为32.5 ℃，与野生酶DBAT一致；DBATF160C 与DBAT 的最适反应

C165W N300I C165W F160C N300I

pH为7.5，略高于DBAT 和DBAT 的最适反应pH(7.0)；DBAT 、DBAT 和DBAT 的比活力与

DBAT相比分别提高了61.5%、59.6%和19.2%，催化效率分别提高了55.4%、35.1%和2.9%，3种突变酶的米式常

数(Km)和最大反应速率(vmax)均高于DBAT。【结论】疏水突变导致突变酶的比活力相比野生型均有显著提高，研

究结果为体外高效酶促合成紫杉醇化学半合成的直接前体物巴卡亭Ⅲ奠定了基础。

关键词: 10β–去乙酰巴卡亭Ⅲ乙酰氧基转移酶；分子模拟对接；定点突变；比活力；酶促反应；巴卡亭Ⅲ

中图分类号: Q55；S18 　　　　 文献标志码: A　　　　 文章编号: 1001-411X(2018)05-0087-06

Increase of 10-deacetyl baccatin Ⅲ-10β-O-acetyl transferase activity

with molecular docking simulation and site-directed mutation

1,2 1,2 1,2 1,2