在ImageJ中进行图片相减的操作可以按照以下步骤进行：

1. 打开两张图片：
   • 首先，你需要在ImageJ中打开两张你想要进行相减操作的图片。这两张图片应该具有相同的尺寸和色彩深度，以确保相减操作能够正确进行。
2. 进入Image Calculator：
   • 在ImageJ的顶部菜单栏中，选择“Process”选项。
   • 在下拉菜单中，找到并点击“Image Calculator”。
3. 设置相减操作：
   • 在弹出的“Image Calculator”窗口中，你会看到两个图像选择框，分别对应“Image 1”和“Image 2”。
   • 从这些框中选择你之前打开的两张图片。注意图片的选择顺序，因为相减操作通常是第一个图片减去第二个图片。
   • 在“Operation”部分，选择“Subtract”选项，这表示你要进行的是相减操作。
4. 设置结果选项（可选）：
   • 如果你希望结果以特定的方式呈现，你可以在“Output”部分设置相应的选项。例如，如果你想要得到的结果是一个浮点数（float）类型的32位图像，你可以勾选“32-bit result”选项。
5. 执行操作：
   • 点击“OK”按钮，ImageJ就会执行相减操作，并将结果显示在新的窗口中。
6. 保存结果（可选）：
   • 如果你想要保存相减后的结果，你可以点击新窗口中的“File”菜单，然后选择“Save As”来保存图片。你可以选择保存为TIFF、JPG或其他格式。

需要注意的是，如果你的图片是RGB格式的，相减操作可能会产生一些意外的结果，因为RGB图像包含红、绿、蓝三个通道，每个通道都需要单独处理。在这种情况下，你可能需要先将RGB图像转换为灰度图像，然后再进行相减操作。