用于WB的抗体一定能用来做IHC吗?

首先,我们来了解下抗原表位。由于蛋白可以折叠成三维结构。

所以抗原表位可以分成两种类型:

线性表位

一般指的是由序列上相连接的一些氨基酸残基通过共价键形成的结构,也称为顺序表位,是蛋白质的一级结构,比较稳定,不受蛋白质加热变性和空间构形改变的影响。

构象表位

也称为空间表位,是由序列上不连续的氨基酸残基通过折叠形成的特定三维空间结构所构成的表位,是蛋白质的二级或三级结构,在加热或者其他变性条件处理后会破坏其结构。识别构象表位的抗体可用来研究蛋白质在生理状态下的功能与结构。

而我们了解到,实验室的基础实验用的抗体所识别的抗原表位是有所差异的,下面龙宝总结了一些常见实验中用到的抗体对应的抗原表位类型:

回到开头的问题:用于WB的抗体一定能用来做IHC吗?

由上表可知,WB实验用到的抗体识别的抗原表位一般是线性表位,而IHC实验用到的抗体识别的抗原表位是构象表位。所以答案是用于WB的抗体不一定能用来做IHC,反之能用于IHC的抗体也同样不一定能适用于WB。

说完了线性表位和构象表位之间的抗体不能通用,那识别构象表位与构象表位的抗体是否能通用呢?

譬如:IHC-P与IP的抗体都是识别的构象表位,那两者是否能互通呢?

答案是否定的,我们博奥龙的抗体每个质保应用的质检都是相互独立的。

先来了解下IHC-P的实验流程

此实验其中有一个用醛类试剂“固定”的步骤,目的是为了保持组织中蛋白的天然结构,但是这一操作可能会在一定程度上掩盖抗原表位,因此后续通过“抗原修复”使抗原表位重新暴露出来。但是经过高温高压--缓慢降温的步骤,最终得到的稳定的蛋白结构不一定和天然的蛋白构象保持绝对一致。而IP实验操作中并不存在此类对蛋白处理的过程,所以有些能用于IHC的抗体并不一定适用于IP,甚是个别抗体识别表位较为特殊,未按照说明书标注的特殊要求操作也会造成实验失败的风险。

综上所述,我们能清楚的知道,不同的实验、不同的抗体,对抗原表位的要求不一样,所以在购买抗体时,一定要看抗体是否验证过自己想做的实验类型,仔细选择。如果没有理想的抗体可供选择,一定要自行预实验检测,将实验损失及风险降到最低。

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