洁净室（区）浮游菌检测标准操作规程及GB/T 16292-2010测试方法解读

洁净室(区)空气中浮游菌的检测。洁净区浮游菌检测是一种评估和控制洁净区(如实验室、生产车间等)内空气质量的方法。这种检测的目的是通过测量空气中的微生物(即浮游菌)数量，来评估洁净区的清洁度或污染程度。下面中邦兴业小编带大家详细看下如何进行浮游菌采样检测。

浮游菌的检测，也需要动态和静态都检测吗?

是的，静态检测可以帮助我们了解在无人活动、设备关闭或运行最小化的情况下，洁净区的微生物污染程度。而动态检测则可以帮助我们了解人员活动、设备运行等可能对洁净区的微生物污染产生影响的因素。

我们在对洁净区进行浮游菌检测时这两种状态下的检测都是必要的，因为它们可以从不同的角度反映出洁净区的微生物污染情况。根据这两种测试的结果，可以采取相应的措施来改善和控制洁净区的微生物污染情况。

检测洁净室(区)浮游菌是否需要用到专业的仪器?具体的测试方法?

浮游菌的测试需要使用浮游菌采样器收集空气样本，浮游菌采样器一般采用撞击法机理，可分为狭缝式采样器、离心式或针孔式采样器。通过不同机理将采集的空气撞击到专用的固形培养基表面，空气内附着的活性微生物粒子将被接种在培养基上，在适当的温度和时间培养下，活性微生物粒子将形成清晰可见的菌落。计算可得浮游菌平均浓度，完成浮游菌测试。

【专业解读】基于ISO14698选择哪种类型的浮游菌采样器？

《药品生产质量管理规范(2010 年修订)》附录1-无菌药品第十一条 应当对微生物进行动态监测，评估无菌生产的微生物状况。监测方法有沉降菌法、定量空气浮游菌采样法和表面取样法(如棉签擦拭法和接触碟法)等。动态取样应当避免对洁净区造成不良影响。成品批记录的审核应当包括环境监测的结果，对表面和操作人员的监测，应当在关键操作完成后进行。在正常的生产操作监测外，可在系统验证、清洁或消毒等操作完成后增加微生物监测。

浮游菌测试要点

1.必须按照测试仪器的检定周期，定期对仪器作检定。使用校验合格，且在使用有效期内的仪器。

2.测试仪器在未进入被测区域时,若必需,则先清洁表面或在相应的洁净室内准备和存放(用保护罩或其他适当地外罩保护仪器)。

3.在 100 级洁净室内用纸时，上面应蒙上一张透明不沾尘的覆盖物，在100 级洁净室内不能用铅笔和橡皮，

4.使用测试仪器时应严格按照仪器说明书操作。

4.1 仪器开机，预热至稳定后，方可按仪器说明书的规定对仪器进行校正，同时检查采样流量，并根据采样量设定采样时间。

4.2 采样口必须用便于消毒及化学性能稳定的材料制造

4.3 采样管严禁渗漏，内壁应光滑。

4.4 采样管的长度应根据测点的高度定,尽量减少弯曲。

培养皿

一般采用中90 mmx15mm 规格的培养皿。可根据所选用采样器选择合适的培养皿。离心式采样器采用专用的固形培养条。

培养基

大豆酪蛋白琼脂培养基(TSA)或沙氏培养基(SDA)或其他用户认可并经验证了的培养基。

恒温培养箱

必须定期对恒温培养箱进行校验。

测试步骤

测试前仪器、培养皿表面必须严格消毒。

1.采样器进入被测房间前先用消毒房间的消毒剂灭菌，用于 100 级洁净室的采样器宜预先放在被测房间内。

2.用消毒剂擦净培养皿的外表面。

3.采样前，先用消毒剂清洗采样器的顶盖、转盘以及罩子的内外面采样结束，再用消毒剂轻轻喷射罩子的内壁和转盘。

4.采样口及采样管，使用前必须高温灭菌。如用消毒剂对采样管的外壁及内壁进行消毒时，应将管中的残留液倒掉并晾干。

5.采样者应穿戴与被测洁净区域相应的工作服，在转盘上放入或调换培养皿前，双手用消毒剂消毒或戴无菌手套操作。

6.采样仪器经消毒后先不放入培养皿，开启浮游菌采样器使仪器中的残余消毒剂蒸发，时间不少于5min，并检查流量并根据采样量调整设定采样时间。

7.关闭浮游菌采样器，放入培养皿，盖上盖子

8.置采样口于采样点后，开启浮游菌采样器进行采样。

培养

全部采样结束后，将培养皿倒置于恒温培养箱中培养。TSA:在 30℃~35 ℃培养箱中培养，时间不少于 2d; SDA:在20℃℃~25 ℃培养箱中培养，时间不少于 5d。每批培养基应有对照试验，检验培养基本身是否污染。可每批选定3只培养皿作对照培养。

菌落计数

用肉眼对培养皿上所有的菌落直接计数、标记或在菌落计数器上点计，然后用5~10 倍放大镜检查，有否遗漏。若平板上有 2 个或 2 个以上的菌落重叠，可分辨时仍以2个或2个以上菌落计数。

注意事项

使用前应仔细检查每个培养皿的质量，培养基及培养皿有变质、破损或污染的不能使用。对培养基、培养条件及其他参数作详细的记录。由于细菌种类繁多，差别甚大，计数时一般用透射光于培养皿背面或正面仔细观察，不要漏计培养皿边缘生长的菌落，并须注意细菌菌落或培养基沉淀物的区别，必要时用显微镜鉴别。

测试条件

在测试之前，要对洁净室(区)相关参数进行预先测试，这类测试将会提供测试悬浮粒子的环境条件，例如:这种预先测试或可包括:a)温度和相对湿度的测试。洁净室(区)的温度和相对湿度应与其生产及工艺要求相适应(无特殊要求时，温度在 18 ℃℃~26 ℃℃，相对湿度在 45%~65% 为宜),同时应满足测试仪器的使用范围:b)室内送风量或风速的测试，或压差的测试:c)高效过滤器的泄漏测试。

测试状态

a)静态和动态两种状态均可进行测试。b)静态测试时，室内测试人员不得多于 2 人。c)浮游菌测试前，被测洁净室(区)由用户决定是否需要预先消毒。d)测试报告中应标明测试时所采用的状态和室内测试人员数。

测试时间

1. 在空态或静态 a 测试时，对单向流洁净室(区)而言，测试宜在净化空气调节系统正常运行时间不少于 10 min 后开始。对非单向流洁净室(区),测试宜在净化空气调节系统正常运行时间不少于30 min后开始。在静态 b 测试时，对单向流洁净室(区)，测试宜在生产操作人员撤离现场并经过 10 min 自净后开始:对非单向流洁净室(区),测试宜在生产操作人员撤离现场并经过20分钟自净后开始。

2.在动态测试时，则须记录生产开始的时间以及测试时间。

采样点数量及其布置

最少采样点数目: 浮游菌测试的最少采样点数目可参照上篇小课堂《洁净室(区)悬浮粒子检测方法及要点》(GB/T16292-2010)

采样点的位置: 浮游菌的采样点位置可参照上篇小课堂《洁净室(区)悬浮粒子检测方法及要点》( GB/T 16292-2010)。a)工作区测点位置离地 0.8m~1.5m 左右( 略高于工作面 ):b)送风口测点位置离开送风面 30 cm 左右:c)可在关键设备或关键工作活动范围处增加测点。

采样次数每个采样点一般采样一次。

记录

测试报告应包含以下内容:a)测试者的名称和地址，测试日期b)测试依据;c)被测洁净室(区)的平面位置(必要时标注相邻区域的平面位置 ):d)有关测试仪器及其测试方法的描述:包括测试环境条件,采样点数目以及布置图,测试次数，采样流量或可能存在的测试方法的变更，测试仪器的检定证书等:若为动态测试，则还应记录现场操作人员数量及位置，现场运转设备和数量和位置;e)测试结果，包括所有统计计算资料。

结果计算

用计数方法得出各个培养皿的菌落数，每个测点的浮游菌平均浓度的计算:

浮游菌平均浓度(个/m)=菌落数/采样量

(1 m'=1 000 L)

结果评定

1.每个测点的浮游菌平均浓度必须低于所选定评定标准中的界限。

2在静态测试时，若某测点的浮游菌平均浓度超过评定标准，则应重新采样两次，两次测试结果均合格才能判为符合。