PEI转染试剂残留检测

转染试剂是瞬时转染生产病毒载体的主要原材料之一。聚乙烯亚胺(Polyethylenimine, PEI)以其适用性广泛、成本低廉、操作简便、细胞毒性低、可以在多种哺乳动物细胞中达到较高的转染效率,适用于无血清悬浮转染环境,包装容量不受限制,已经成为病毒生产中被广泛实用的转染试剂之一。然而,PEI不易在体内生物降解,因此需要严格控制其在基因治疗药物制剂中的残留,那么,如何进行PEI转染试剂的残留检测呢?一起和小编看看吧!

阳离子的PEI非常容易结合带负电荷的DNA分子,形成复合物,并转染到贴壁或悬浮细胞中,广泛应用在细胞和基因治疗领域。但是PEI在体内不易生物降解而产生富集,因此严格控制PEI在基因治疗制剂中的残留以避免对生物体造成潜在风险是非常有必要的。

但由于PEI带大量正电荷,极性强,在反相色谱系统上没有保留,且PEI没有显著的紫外吸收基团,因此无法用传统的紫外-可见波长检测器、二极管阵列检测器或者荧光检测器进行检测,而传统的示差折光检测器、蒸发光散射等通用型检测器,在灵敏度、线性范围、响应一致性及稳定性方面尚未表现出较好的效果。

为了检测PEI转染试剂的残留量,实验室通常采用高效液相色谱法(HPLC)。这种方法具有分离度好、灵敏度高、线性关系良好、精密度和准确度高等优点。通过优化色谱条件,如选择合适的流动相、调整流速和柱温等,可以实现PEI的高效分离和准确测定。同时,利用标准曲线法或内标法等方法,可以进一步提高检测的准确性和可靠性。

蒸发光散射检测器(ELSD)能检测不含发色团的化合物,如:碳水化合物、脂类、聚合物、表面活性剂、药物等,并且能在没有标准品及化合物结构参数未知的情况下检测未知化合物。此外,ELSD的响应不依赖与样品的光学特性,任何挥发性低于流动相的样品均能被检测,不受其官能团的影响。利用此特性,HPLC-ELSD可以通过紫外检测器对缺乏紫外吸收基团且不易挥发的PEI进行测定。

以上是两种针对PEI转染试剂残留检测方法。在使用PEI进行转染前,建议根据实验要求和转染细胞类型选择合适的PEI转染条件,并严格按照转染试剂的说明书操作,避免PEI残留对实验结果产生干扰。随着分析技术的不断发展,未来药物研发的不断加速以及不断涌现,给相关研究人员带来巨大挑战。

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